Desarrollo de una vacuna génica contra el virus de la fiebre aftosa utilizando adyuvantes moleculares y químicos. Evaluación de la respuesta inmune inducida

Abstract

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad aguda, febril, contagiosa y económicamente importante, que afecta principalmente a animales de pezuña hundida. El agente etiológico, el virus de la fiebre aftosa (VFA) posee un ácido ribonucleico ARN (+) monocatenario, que proporciona la información para la producción de las proteínas no estructurales y una poliproteína estructural, P1, cuya proteólisis da lugar a las proteínas de la cápside proteica icosaédrica VP1, VP2, VP3 y VP4. La vacuna utilizada para controlar el VFA contiene virus inactivo con un adyuvante oleoso, la producción de VFA inactivo (VFAi) requiere un alto costo en instalaciones de contención con un riesgo permanente de fuga del virus. Por lo cual, en los últimos años se han probado diferentes vacunas alternativas, entre ellas se ha propuesto, el uso de vacunas génicas que resultan más seguras y fáciles de producir. En este trabajo de tesis, se propuso como vacuna génica a los vectores plasmídicos que poseen la secuencia que codifica para la proteína VP1 (pVP1) y para la poliproteína P1 y las proteinasas 2A y 3C (pP) del VFA de la cepa O1 Campos junto a un adyuvante químico ESSAI 95201 (Ady101) y plásmidos que codifican para moléculas que potencian la respuesta inmune como ser las moléculas co-estimuladoras del receptor T, CD40L y RANKL, o IL15. Se pudo demostrar que las formulaciones que incluyeron la proteína VP1 ya sea en su forma citosólica o secretada no indujeron una buena respuesta protectora en los ratones desafiados con el VFA O1Campos. Por el contrario, se obtuvo una respuesta protectora total en el 80% de los ratones en el grupo de pP+pIL15+Ady101 y del 60 % de los ratones del grupo pP+ pCD40L+Ady101. Todos los grupos vacunados con estas vacunas génicas indujeron una respuesta inmune humoral, sin embargo no se encontraron diferencias significativas en el título de anticuerpos (acs) anti-VFA inducido por las diferentes formulaciones. Además, no se encontraron diferencias significativas en el título de los isotipos de las inmunoglobulinas, ni en la avidez con respecto al grupo pP y tampoco se indujeron en los ratones inmunizados con esta vacunas acs seroneutralizantes (SN). Por otro lado, se pudo demostrar que en los ratones inmunizados tanto con pP+pCD40L+Ady101 y pP+pIL15+Ady101 tienen un número mayor de células secretoras de IFN que el grupo pP. Por lo cual, la protección podría deberse a la actividad antiviral de esta citoquina, como la activación de los linfocitos T (LT) CD8, células Natural Killer (NK) y macrófagos (MO). Asimismo, en el grupo pP+pIL15+Ady101 se observó un incremento significativo de linfocitos B (LB) y LT CD4, LT CD8, MO y células NK con respecto al grupo pP. Por lo cual, IL15 además de inducir la actividad antiviral de IFN, induciría la proliferación de estas poblaciones. Finalmente, para mejorar la respuestas protectoras de estas vacunas, se reemplazó el último refuerzo con una dosis subinmunizante de VFAi logrando el 100 % de protección en el grupo pP+pIL15+Ady101 y un 80% en el grupo pP +pCD40L+ Ady101 y en el pP y sólo un 20 % en los grupos VFAi y pCI-neo.