Estudio de los reservorios virales en la infección por HIV-1 en pediatría : caracterización de las formas virales latentes y su comportamiento durante el tratamiento antirretroviral combinado

Abstract

Desde el inicio de la epidemia del virus de inmunodeficiencia humana (HIV-1, del inglés human immunodeficiency virus type 1), aproximadamente 75 millones de personas contrajeron la infección y 32 millones murieron por causas asociadas a la misma. En 1997, con el advenimiento de la terapia antirretroviral combinada (TARVc) contra el HIV-1, se logró por primera vez controlar significativamente y de forma sostenida la replicación del virus, llevando sus niveles en plasma a valores inferiores al límite de detección de los ensayos moleculares disponibles. A este hecho se suma que entre 2005 y 2010 se reunió evidencia suficiente para demostrar que el inicio temprano del TARVc mejora considerablemente la morbi-mortalidad de las personas que viven con HIV-1. No obstante estos grandes avances, la erradicación del HIV-1 aún no se ha logrado. Esto se debe principalmente a que luego de la infección, el virus se establece muy tempranamente en células de larga vida, principalmente células T CD4+ de memoria, y puede permanecer indefinidamente en un estado de silenciamiento, evadiendo su reconocimiento por parte del sistema inmune y de las drogas antirretrovirales. Estas células que albergan variantes latentes, pero funcionales del HIV-1, se denominan reservorios virales, y constituyen una fracción muy pequeña del total de células infectadas, la cual se estima que es <7% (~ 1 célula T CD4+ en reposo/millón). Dentro de este contexto, se planteó como objetivo general del presente trabajo determinar la dinámica de establecimiento y mantenimiento del reservorio del HIV-1 en niñas, niños y adolescentes que contrajeron la infección por transmisión vertical. Asimismo, se planteó determinar, en dicha población, el impacto del tiempo de inicio de tratamiento y de la supresión viral (SV) en el establecimiento y mantenimiento del reservorio. Para ello, en primer lugar, se desarrollaron y validaron 3 ensayos para la cuantificación de diferentes marcadores moleculares del tamaño del reservorio viral -copias de genoma de ADN de HIV-1 (ADN-HIV total), círculos de 2-LTR (forma episomal de HIV-1) y ARN intracelular de HIV-1 (ARN-HIV) no procesado- en células mononucleares totales (CMT). Estos ensayos mostraron una elevada sensibilidad (3 a 7 copias/reacción) y reproducibilidad (desvío estándar inter-ensayo <0,9), además de una capacidad de detección del virus del 94,4% (68/72) en muestras de pacientes HIV-positivos, y del 92,9% (39/42) en aquellas muestras donde la carga viral plasmática (CVp) fue inferior al límite de cuantificación de los ensayos comerciales. En cuanto a la dinámica del tamaño del reservorio viral bajo TARVc efectivo (o SV), se halló una caída significativa del nivel de ADN-HIV total durante los primeros dos años de SV (p<0,001), con un clara tendencia hacia un mayor decaimiento en aquellos pacientes que alcanzaron la SV tempranamente (pendiente igual a -0,68 vs -0,33 y -0,29 log10 copias/millón de CMT en pacientes con inicio de SV ≤1,5 años vs >1,5 - 5 años y >5 años, respectivamente). Luego de los dos años de SV el ADN-HIV total alcanzó un estado de equilibrio y permaneció constante, independientemente de la edad de inicio de la SV. Esta dinámica no se vio afectada por la edad de inicio de TARVc, en contra de lo esperado, pero justificada en buena parte por el hecho de que un inicio temprano no necesariamente va acompañado de una buena adherencia, y por ende de una SV temprana. Finalmente, en la búsqueda de mecanismos de persistencia del reservorio de HIV-1 en circulación, no se encontraron evidencias de evolución viral, ni de trazas de intermediarios de replicación viral (círculos de 2-LTR) durante 6 a 15 años de SV, en pacientes que alcanzaron dicha SV antes del año de vida. Sumado a ello se encontró que una proporción mayoritaria de las variantes virales en SV (>70%) estaba presente previo al inicio del TARVc (6 a 15 años antes). Estos resultados sugieren que la proliferación de las células infectadas previo al inicio del TARVc -fenómeno de expansión clonal- es el principal mecanismo de mantenimiento del reservorio del HIV-1. Los resultados del presente trabajo de tesis aportan una mayor comprensión de los mecanismos y la dinámica de persistencia del reservorio en la infección perinatal por HIV-1, los cuales resultan relevantes para avanzar en la búsqueda de los factores determinantes del éxito de la remisión virológica en ausencia de TARVc y la investigación de enfoques tendientes hacia la cura del HIV-1.