Producción de antígenos recombinantes y su empleo en métodos serológicos para la detección de infecciones flavivirales de importancia regional

Abstract

Los arbovirus son un grupo diverso de virus que se mantienen en la naturaleza a través de la transmisión entre hospedadores susceptibles, mediante ciertas especies de artrópodos hematófagos. Se han convertido en un importante problema de salud mundial en las últimas cuatro décadas, debido a que tienen la capacidad de infectar múltiples hospedadores y colonizar nuevos vectores y hospedadores vertebrados a través de mutaciones adaptativas, pudiendo además aumentar su virulencia y potencial epidémico. Dentro de los arbovirus más relevantes encontramos a los virus pertenecientes al género Flavivirus, un género de virus que forma parte de la familia Flaviviridae. Son virus envueltos que poseen una nucleocápside con simetría icosaedrica, y cuyo material genético reside en una única cadena de ARN de polaridad positiva de aproximadamente 11 kb de longitud. Estos virus son los causantes de numerosas enfermedades en animales y humanos generando graves problemas de salud pública alrededor del mundo, siendo los más conocidos los virus de la fiebre amarilla, dengue, Zika, West Nile y el virus encefalitis de Saint Louis que ha tenido relevancia en América. En base a este panorama, donde las enfermedades transmitidas por vectores constituyen una causa importante de muerte, enfermedad e inequidad en la salud, el progreso continuo en herramientas de vigilancia epidemiológica y en sistemas de diagnóstico son una contribución importante para la salud pública. De esta manera, el objetivo de este trabajo fue desarrollar herramientas moleculares que den lugar al desarrollo de ensayos de diagnóstico para flavivirus, basadas en la detección de la respuesta inmune en pacientes. En esta tesis de doctorado se realizó la producción en bacterias y caracterización inmunológica de distintos antígenos basados en las secuencias completas de la proteína NS1 de los flavivirus Dengue, Fiebre Amarilla, Zika, West Nile y encefalitis de Saint Luis. Adicionalmente se llevó a cabo el desarrollo de antígenos recombinantes con diseño racional, mediante una estrategia de predicción bioinformática de regiones de NS1 que presentan alta probabilidad teórica de formar epítopes lineales para células B. A fin de establecer la utilidad de los antígenos generados, se llevó a cabo la evaluación del desempeño diagnóstico en el formato de test de ELISA indirecto. Para ello se emplearon muestras de sueros humanos negativos y positivos para distintos flavivirus, obteniéndose resultados satisfactorios. Los valores de sensibilidad y especificidad determinados son comparables con los valores obtenidos en otros trabajos con ensayos de ELISA basados en proteínas o partículas virales enteras. Los resultados alcanzados en el presente trabajo de investigación son promisorios y sientan las bases para el diseño de nuevos ensayos de diagnóstico basados en los antígenos producidos.